一种气相防霉剂性能的实验研究

一种气相防霉剂性能的实验研究

李易   施新荣   陈师

（佛山科普茵生物科技有限公司，佛山，528200）

提要 目的 研究复配型气相防霉剂外控型防霉等相关性能。方法采用理化分析和现场试验及动物试验方法，对该气相防霉剂的稳定性、防霉效果及其毒性进行了观察。结果配制气相防霉剂的有效固含量为193.4g/L，置37℃储存90d后，下降率为0.32%。用该气相防霉剂2.5μL置于100ml相对密封容器中释放防霉因子作用24h，对容器中培养基上霉菌的杀灭率达到100％。在使用量0.5ml的条件下，对5L普通鞋盒进行防霉效果测试，连续作用28天，可使鞋盒内皮革、木材、棉布的在高温高湿条件下不发霉。雌雄小鼠急性经口毒性LD₅₀值平均为1794mg/kg（体重），属微毒级物质；小鼠急性吸入毒性LC₅₀均大于10000mg/m³，属实际无毒级；对小鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核突变作用。结论： 复配型气相防霉剂有良好的防霉效果和稳定性，毒性低。

关键词：气相防霉剂；缓释；稳定性；防霉效果；毒性

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本研究防霉剂为一种复配型气相防霉剂，其A剂为66ml浅蓝色透明液体，pH值为11.45，为一种氮硫类化合物溶液；B剂为33ml无色透明液体，为低刺激性阳离子防霉抗菌剂，即季铵盐类和双胍类的混合物。使用时将B剂溶解于A剂，发生缓慢活化释放出防霉因子，并且稳定A剂中主要活性成分。为研究该气相防霉剂的防霉相关性能，我们进行了实验室和现场试验研究。现将结果报告如下。

1方法

1.1防霉剂的配制

用电子天平秤取B剂33ml和A剂66ml混合充分，于60℃缓慢搅拌，搅拌速度为60r/min，最后滴入氢氧化钠溶液，调pH至4.3。恢复室温即可。

1.2稳定性试验

将该防霉剂产品置37℃温箱储存90d，然后用液相色谱法测定储存前后样品含量的变化，计算其下降率。

1.3试验菌悬液制备

试验指标菌为黑曲霉、黄曲霉、绿色木霉、杂色曲霉、球毛壳霉、宛氏拟青霉，经过分离纯化，取典型菌落划线接种沙氏培养基斜面，于28℃培养3~5天。将新鲜斜面培养物用普通营养肉汤洗下并经过无菌脱脂棉过滤除去培养基残渣，稀释配制成试验浓度菌悬液，备用。

1.4气相防霉剂小空间模拟实验

将试验菌营养肉汤悬液滴加入已灭菌的沙氏培养基上，将接种的培养基放入100ml的容器中一端，在另一端用移液器滴加气相防霉剂2.5μL，确保两者不接触；空白对照组不滴防霉剂。24小时后取出培养基，盖好培养皿盖后于28℃下培养3~7天，观察结果，评价其防霉效果。

1.5气相防霉剂实际防霉效果试验

选择大小为5L的盒子作为实际使用空间，在常温常湿条件下进行实际防霉试验。在处理前将10组相同的皮革、棉布和木材进行高温高压灭菌。使用灭菌的玻璃雾化器将试验菌营养肉汤悬液均匀喷洒在皮革、棉布和木材，悬挂在盒子内，于盒内放置100ml水，保证空间湿度。在盒子底部正中间用移液器滴加气相防霉剂0.5ml。将未加气相放霉剂的同批盒子，作为空白对照组。将试验组和空白组放置于室温28天后观察结果，评价其实际防霉效果。

1.6急性经口毒性试验

采用霍恩氏法，选择体重18～22g清洁级昆明种小鼠（长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，许可证号为SCXK（湘）2006-0001）40只随机分为4组，每组10只，雌雄各半。分别设剂量为5000、2500、1000、500mg/kg体重等4组，按计算量将气相防霉剂进行适当稀释。灌胃前禁食16h，采用一次性经口灌胃给药，灌胃量为0.2ml/10g体重，灌胃后连续观察14d，记录中毒表现及死亡情况，计算半数动物致死量LD₅₀值。

1.7急性吸入毒性试验

选择体重18～22g清清洁级昆明种小鼠20只，雌、雄各10只（动物来源与许可证号同上），采用静式吸人染毒法进行实验。按一次性最大限量法，设剂量为100000mg/m3。实验时按所需消毒剂量，加热气相防霉剂，把挥发出的防霉气体导入300L染毒柜中，让动物连续吸入2h，观察动物的中毒表现及死亡情况，计算LC₅₀值。

1.8小鼠骨嗜多染红细胞微核试验

选择体重25～30g清洁级昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。雄鼠组受试物剂量分别为397、159、40mg/kg体重，雌鼠组剂量分别为463、185、46mg/kg体重。阳性对照组为环磷酰胺40mg/kg体重，阴性对照组给蒸馏水。将受试物按需要量气相防霉剂配制成各剂量组。采用经口灌胃30h染毒法，分两次给药，间隔24h，每次灌胃量为0.2m/10g体重。末次给药后6h颈椎脱白处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定， Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数100个嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，计算微核率（以千分率计），按 Poisson分布统计处理；计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例（PCE/NCE）。

2结果

2.1稳定性试验结果

该气相防霉剂于37℃条件下储存90d，储存前样品固化物含量用液相色谱法测定为193.4g/L，固含物含量平均下降率为0.32%（表1）

表1 气相防霉剂稳定性测定结果

储存前后含量均值      下降率

测定方法          （g/L）             %

            储存前       储存后

液相色谱法   193.4        192.8       0.32

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2.2气相防霉剂小空间模拟实验结果

用该复配型气相防霉剂2.5μL置于100ml容器释放防霉因子作用24h，取出培养基盖好盖子置于28℃培养7天，培养基无霉菌生长，空白组培养基长满霉菌。

2.3气相防霉剂实际防霉效果试验

用该复配型气相防霉剂0.5ml作用于5L的鞋盒。28天后，里面的皮革、棉布和木材不发霉；空白组长满了霉菌。

2.4毒性试验结果

急性经口毒性试验结果表明，该复配型气相防霉剂对雄性小鼠急性经口LD₅₀为1794mg/kg（体重）；对雌性小鼠急性经口LD₅₀为1926mg/kg（体重），均属于微毒级。

急性吸入毒性试验结果表明，该复配型气相防霉剂对雌雄小鼠的急性吸入LC₅₀2h均大于10000mg/m3，属实际无毒级

小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验发现，该复配型气相防霉剂各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性，而环磷酰胺组与阴性对照组比较差异有高度显著性（P＜0.01），各组PCE/NCE比值均在正常范围内。

3讨论

复配型气相防霉剂储存性能稳定好，不易降解和失效，37℃储存90d，有效成分下降率分别 为0.32%，符合要求下降率。该复配型气相防霉剂用于相对密闭空间的霉菌杀灭效果好，且使用方便，不必要特殊设备。并且毒性低，不危害人体安全，操作更加放心。